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針對(duì)上述問(wèn)題，內(nèi)華達(dá)大學(xué)拉斯維加斯分校Chandrabali Bhattacharya教授開(kāi)發(fā)了一種名為內(nèi)源靶向脂質(zhì)納米顆粒（ENDO）的新平臺(tái)，通過(guò)在LNP配方中加入內(nèi)源性配體（如維生素）作為第五組分，調(diào)節(jié)其器官趨向性并增強(qiáng)靶向遞送能力。研究篩選了100種不同配方的LNPs，這些配方包含多種內(nèi)源性維生素、不同的離子化脂質(zhì)和獨(dú)特的配方比例，以評(píng)估其組織特異性遞送潛力。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，兩種含有膽鈣化醇作為第五組分的配方（C-CholF2和C-CholF3）可通過(guò)靜脈注射實(shí)現(xiàn)對(duì)胰腺的高選擇性mRNA遞送，其中C-CholF3在胰腺的蛋白表達(dá)效率更高，具有超過(guò)99%的選擇性和長(zhǎng)達(dá)3天的持續(xù)表達(dá)能力。研究推測(cè)其胰腺趨向性可能與維生素D受體（VDR）介導(dǎo)的內(nèi)源靶向機(jī)制有關(guān)。此外，C-CholF3還可用于遞送其他核酸載荷，包括質(zhì)粒DNA和環(huán)狀mRNA，且具有較低的毒性、更好的安全性和耐受性。在A(yíng)i14小鼠模型中，C-CholF3 LNP還實(shí)現(xiàn)了胰腺的組織特異性基因編輯。該研究證明了將內(nèi)源性維生素作為L(zhǎng)NP第五組分的重要性，并為靶向難以到達(dá)的肝臟外器官（如胰腺）提供了新的策略，有望用于治療目前無(wú)法治愈的胰腺疾病。該文章于2025年6月12日以《Reengineering Endogenous Targeting Lipid Nanoparticles (ENDO) for Systemic Delivery of mRNA to Pancreas》為題發(fā)表于《Advanced Materials》上（（DOI：10.1002/adma.202507657）。

圖1 第五組分ENDO LNP制劑及篩選平臺(tái)概覽。（a）目前開(kāi)發(fā)肝外遞送系統(tǒng)面臨的挑戰(zhàn)示意圖；（b）ENDO LNP制劑及篩選平臺(tái)示意圖；（c）不同制劑比例的餅狀圖，包括可離子化脂質(zhì)、磷脂、膽固醇、PEG脂質(zhì)和內(nèi)源性維生素第五組分

（1）ENDO LNPs 的體外篩選

傳統(tǒng)mRNA遞送用的脂質(zhì)納米顆粒（LNPs）由四種關(guān)鍵成分組成：離子化脂質(zhì)、輔助脂質(zhì)、膽固醇和聚乙二醇脂質(zhì)。為增強(qiáng)LNPs的器官特異性遞送能力，研究中加入了維生素A、B2、D3、E和K1作為第五組分。開(kāi)發(fā)了一個(gè)全面的配方庫(kù)，使用了SM-102、MC3、C12-200、THP1和306Oi10等離子化脂質(zhì)，基于基準(zhǔn)配方（摩爾比為35:16:46.5:2.5）設(shè)計(jì)了四種不同配方比例，并系統(tǒng)研究了維生素摩爾比對(duì)LNPs性能的影響（圖1C）。通過(guò)手工混合在96孔板中制備了100種不同配方的LNPs，結(jié)合了五種離子化脂質(zhì)、五種維生素和四種配方比例。動(dòng)態(tài)光散射（DLS）測(cè)量顯示，大多數(shù)LNPs的平均直徑在60~140 nm之間，PDI小于0.2，與傳統(tǒng)LNPs結(jié)構(gòu)相似。

在多種細(xì)胞系（HEK293、HFF、HUVEC、RAW264.7和HMC3）中評(píng)估了所有LNPs的體外轉(zhuǎn)染效率。結(jié)果表明，與對(duì)照組MC3和SM-102相比，ENDO LNPs的轉(zhuǎn)染效率顯著提高。例如，在HEK293細(xì)胞中，以視黃醇、核黃素和葉綠醌為第五組分的LNPs轉(zhuǎn)染效率更高（圖2A）；在HFF細(xì)胞中，以視黃醇、核黃素和生育酚為第五組分的SM-102 LNPs轉(zhuǎn)染效率更高（圖2B）；在HUVEC細(xì)胞中，C12-200和306Oi10為基礎(chǔ)的LNPs表現(xiàn)出更高的轉(zhuǎn)染效率（圖2C）；在RAW264.7細(xì)胞中，C12-200為基礎(chǔ)的LNPs轉(zhuǎn)染效率更高（圖2D）；在HMC3細(xì)胞中，以視黃醇、核黃素和葉綠醌為第五組分的C12-200 LNPs轉(zhuǎn)染效率更高（圖2E）。這些結(jié)果表明，將維生素作為第五組分加入ENDO LNPs可以顯著提高轉(zhuǎn)染效率，為實(shí)現(xiàn)組織特異性遞送提供了依據(jù)。

圖2 ENDO LNPs的體外篩選。（a）在HEK293細(xì)胞中體外遞送熒光素酶mRNA的熱圖（每孔125 ng mRNA，96孔板，n=3），處理24小時(shí)后量化發(fā)光強(qiáng)度；（b）在HFF細(xì)胞中體外遞送熒光素酶mRNA的熱圖（每孔125 ng mRNA，96孔板，n=3），處理24小時(shí)后量化發(fā)光強(qiáng)度；（c）在HUVEC細(xì)胞中體外遞送熒光素酶mRNA的熱圖（每孔125 ng mRNA，96孔板，n=3），處理24小時(shí)后量化發(fā)光強(qiáng)度；（d）在RAW 264.7細(xì)胞中體外遞送熒光素酶mRNA的熱圖（每孔125 ng mRNA，96孔板，n=3），處理24小時(shí)后定量分析發(fā)光強(qiáng)度；（e）在HMC3細(xì)胞中體外遞送熒光素酶mRNA的熱圖（每孔125 ng mRNA，96孔板，n=3），處理24小時(shí)后定量分析發(fā)光強(qiáng)度。縮寫(xiě)：T1，THP1；C12，C12-200；SM，SM-102；306，306Oi10；F1，配方1；F2，配方2；F3，配方3；F4，配方4

（2）使用批量分析進(jìn)行ENDO LNPs體內(nèi)篩選

通過(guò)綜合批量分析評(píng)估了ENDO LNPs的體內(nèi)遞送效率。研究將100種LNPs按配方比例分為四組（F1、F2、F3和F4），每組包含25種配方。這些LNPs以0.5 mg·kg?1的劑量靜脈注射到C57BL/6小鼠體內(nèi)，通過(guò)IVIS成像系統(tǒng)檢測(cè)主要器官的蛋白表達(dá)。結(jié)果顯示，F(xiàn)1和F4主要在肝臟表達(dá)，并在脾臟、腸道和胰腺有少量表達(dá)；F2和F3則顯著重定向到肝臟外，其中F2在胰腺表現(xiàn)出選擇性蛋白表達(dá)，而在其他器官（包括脾臟和肝臟）表達(dá)極少（圖3A）。隨后，基于離子化脂質(zhì)（THP1、C12-200、SM-102、MC3和306Oi10）將F2和F3配方分為五組，每組10種LNPs進(jìn)行注射。結(jié)果表明，C12-200組在胰腺表現(xiàn)出選擇性轉(zhuǎn)染，而其他離子化脂質(zhì)組在多個(gè)器官均有表達(dá)（圖3B）。進(jìn)一步將C12-200配方按不同維生素（視黃醇、核黃素、膽鈣化醇、生育酚和葉綠醌）分組，發(fā)現(xiàn)膽鈣化醇配方在胰腺表現(xiàn)出選擇性mRNA轉(zhuǎn)染和蛋白表達(dá)（圖3C）。在整個(gè)篩選過(guò)程中，SM-102和MC3作為對(duì)照，主要在肝臟積累。

圖3 使用批量分析進(jìn)行ENDO LNPs體內(nèi)篩選。（a）注射后24小時(shí)的IVIS圖像及基于配方（F1、F2、F3、F4）的FLuc mRNA ENDO LNP池總通量的圖形表示，SM-102和MC3作為對(duì)照，C57BL/6小鼠靜脈注射0.5 mg·kg?1混合的ENDO LNPs（n=2只生物學(xué)獨(dú)立小鼠，±SD）。器官?gòu)淖蟮接乙来螢椋盒呐K、肺、脾、胰腺、肝臟、腸和腎臟。（b）注射后24小時(shí)的IVIS圖像及基于可離子化脂質(zhì)的FLuc mRNA ENDO LNP池總通量的圖形表示，靶向胰腺的F2和F3 LNPs按可離子化脂質(zhì)（THP1、C12-200、SM-102、MC3、306Oi10）分批處理后靜脈注射，SM-102和MC3作為對(duì)照（n=2只生物學(xué)獨(dú)立小鼠，±SD）。器官?gòu)淖蟮接乙来螢椋盒呐K、肺、脾、胰腺、肝臟、腸和腎臟。（c）注射后24小時(shí)的IVIS圖像及基于內(nèi)源性維生素的FLuc mRNA ENDO LNP池總通量的圖形表示，靶向胰腺的選擇性C12-200 ENDO LNP按維生素A（視黃醇）、B2（核黃素）、D3（膽鈣化醇）、E（生育酚）、K1（葉綠醌）分批處理后靜脈注射，SM-102和MC3作為對(duì)照（n=2只生物學(xué)獨(dú)立小鼠，±SD）。器官?gòu)淖蟮接乙来螢椋盒呐K、肺、脾、胰腺、肝臟、腸和腎臟

（3）ENDO LNP、C-CholF2 和 C-CholF3 的效果驗(yàn)證

使用微流控裝置制備了C12-200膽鈣化醇F2（C-CholF2）和C12-200膽鈣化醇F3（C-CholF3）LNPs。C-CholF2和C-CholF3的粒徑和包封率（EE%）測(cè)量結(jié)果顯示，兩者粒徑相似且EE%較高，表明mRNA包封效果良好（圖4A）。將C-CholF2和C-CholF3以0.5 mg·kg?1的劑量靜脈注射到C57BL/6小鼠體內(nèi)，C-CholF3和C-CholF2在胰腺表現(xiàn)出選擇性表達(dá)，C-CholF3的平均總通量為1.04×10?，是C-CholF2（2.29×10?）的4.5倍，表明C-CholF3能夠以更高的效率靶向胰腺（圖4B）。通過(guò)腹腔注射途徑評(píng)估了C-CholF3的效率，平均總通量降低到5.94×10?（約為靜脈注射信號(hào)的12%），但對(duì)胰腺的選擇性仍超過(guò)99%。C-CholF3 ENDO LNPs的低溫電子顯微鏡（cryo-EM）圖像顯示其呈球形，具有多層膜殼包裹的非晶態(tài)核心（圖4D）。將0.25、0.5和1 mg·kg?1的C-CholF3 LNPs靜脈注射到C57BL/6小鼠體內(nèi)，觀(guān)察到明顯的劑量依賴(lài)性轉(zhuǎn)染效率提升。

圖4 頂級(jí)ENDO LNP（C-CholF2和C-CholF3）的驗(yàn)證。（a）C-CholF2和C-CholF3及對(duì)照（C12-200）的物理化學(xué)特性，包括尺寸、PDI、ζ電位和mRNA包封效率（n=3，±SD，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，****p<0.0001，NS表示不顯著，采用單因素方差分析及Bonferroni事后分析）。（b）注射后24小時(shí)的代表性IVIS圖像及靜脈注射0.5 mg·kg?1的C-CholF2和C-CholF3 ENDO LNP總通量的圖形表示，PBS和C12-200作為對(duì)照（n=3只生物學(xué)獨(dú)立小鼠，±SD，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，****p<0.0001，NS表示不顯著，采用單因素方差分析及Bonferroni事后分析）。器官?gòu)淖蟮接乙来螢椋盒呐K、肺、脾、胰腺、肝臟、腸和腎臟。（c）餅圖顯示靜脈注射C12-200（傳統(tǒng)四組分）并重定向至胰腺后，C-CholF2和C-CholF3 LNPs在各器官的蛋白表達(dá)百分比（n=3只生物學(xué)獨(dú)立小鼠）。（d）C-CholF3 LNPs的代表性低溫電子顯微鏡圖像，比例尺為50納米

（4）C-CholF3 ENDO LNPs的毒性和安全性評(píng)估

C-CholF3的體內(nèi)生物相容性研究顯示，其處理的胰腺組織在24小時(shí)和48小時(shí)后H&E染色未見(jiàn)形態(tài)學(xué)損傷或炎癥反應(yīng)（圖5A），胰島細(xì)胞保持完整，無(wú)壞死或退行性變化；肝臟組織在48小時(shí)后H&E染色也未見(jiàn)顯著差異。連續(xù)監(jiān)測(cè)21天體重和血液學(xué)參數(shù)發(fā)現(xiàn)，小鼠體重?zé)o顯著下降，肝酶（ALT、AST、堿性磷酸酶）水平正常，未觀(guān)察到腎臟毒性（圖5B）。注射后24小時(shí)檢測(cè)的促炎細(xì)胞因子（IL-1β、IL-6、TNF-α）水平與PBS對(duì)照組相當(dāng)，表明LNP低免疫原性（圖5C），其他免疫生物標(biāo)志物水平也與對(duì)照組相當(dāng)，適合LNP的重復(fù)給藥。這些結(jié)果表明，C-CholF3 ENDO LNPs具有更高的生物相容性和更低的毒性，優(yōu)于傳統(tǒng)C12-200 LNPs。

C-CholF3 LNPs在4℃和-20℃下儲(chǔ)存1、3、7和21天后，物理化學(xué)性質(zhì)變化極小，粒徑、PDI、ζ電位和EE%等參數(shù)保持一致。即使在無(wú)冷凍保護(hù)劑的情況下儲(chǔ)存21天，LNPs仍能保持穩(wěn)健的熒光素酶（FLuc）表達(dá)，表明其具有卓越的穩(wěn)定性，適合長(zhǎng)期儲(chǔ)存和運(yùn)輸。此外，靜脈注射C-CholF3 LNPs到C57BL/6小鼠體內(nèi)后，生物發(fā)光信號(hào)在72小時(shí)內(nèi)保持穩(wěn)?。▓DS14，補(bǔ)充信息），表明其在體內(nèi)具有較長(zhǎng)的穩(wěn)定性和表達(dá)時(shí)間。

通過(guò)TNS實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，靶向胰腺的C-CholF3 LNPs的表觀(guān)pKa值為7.31，高于靶向肝臟的C12-200 LNPs的pKa值6.71。C-CholF3 LNPs能夠遞送多種核酸載荷，包括質(zhì)粒DNA和環(huán)狀mRNA。靜脈注射含有環(huán)狀mRNA或質(zhì)粒DNA的C-CholF3 LNPs后，環(huán)狀mRNA的平均總通量為8.41×10?，質(zhì)粒DNA為1×10?，且兩者的選擇性均超過(guò)99%，表明其對(duì)不同核酸具有廣泛的兼容性。質(zhì)粒DNA可實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)期基因表達(dá)，環(huán)狀mRNA則具有更高的穩(wěn)定性和更低的免疫原性?？傮w而言，C-CholF3 LNPs是一種安全且高效的胰腺靶向核酸治療遞送方法，對(duì)胰腺癌和糖尿病治療具有重要意義。

圖5 C-CholF3 ENDO LNPs的毒性和安全性評(píng)估。（a）C57BL/6小鼠靜脈注射包裹FLuc mRNA的C-CholF3和PBS（對(duì)照，劑量0.5 mg·kg?1）后，胰腺（處理后24和48小時(shí)）和肝臟切片（處理后48小時(shí)）的代表性組織學(xué)圖像，蘇木精-伊紅（H&E）染色，放大倍數(shù)40倍，比例尺60 μm（n=3只生物學(xué)獨(dú)立小鼠）。（b）靜脈注射PBS、C-CholF3和C12-200 LNPs（劑量0.5 mg·kg?1）后24小時(shí)，血清肝酶（丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶ALT和天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶AST）、腎臟參數(shù)（血尿素氮BUN和肌酐）水平（n=3，±SD，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，****p<0.0001；NS表示不顯著，采用單因素方差分析和Bonferroni事后分析）。（c）以0.5 mg·kg?1劑量靜脈注射C-CholF3和C12-200 LNPs的小鼠體內(nèi)IL-6、IL-1β和TNFα水平（n=3只生物學(xué)獨(dú)立小鼠，±SD，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001；NS表示無(wú)顯著性，采用單因素方差分析和Bonferroni事后分析），以注射PBS的小鼠作為對(duì)照組

（5）C-CholF3 ENDO LNPs 內(nèi)源性靶向胰腺的機(jī)制探究

C-CholF3 ENDO LNPs實(shí)現(xiàn)胰腺選擇性遞送的機(jī)制研究結(jié)果如下：共聚焦顯微鏡觀(guān)察顯示，DiO標(biāo)記的C-CholF3 LNPs在BxPC-3細(xì)胞中處理2小時(shí)后與LysoTracker標(biāo)記的內(nèi)體/溶酶體明顯共定位，表明其有效內(nèi)化和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)運(yùn)輸（圖6A）。C-CholF3處理的細(xì)胞DiO熒光強(qiáng)度顯著高于MC3處理的細(xì)胞，提示其細(xì)胞攝取能力更強(qiáng)，推測(cè)與受體介導(dǎo)的內(nèi)化途徑有關(guān)。由于C-CholF3配方中含有膽鈣化醇作為第五組分，推測(cè)其可能通過(guò)與維生素D受體（VDR）的相互作用實(shí)現(xiàn)胰腺細(xì)胞的選擇性攝取。

在體內(nèi)研究中，使用VDR的拮抗劑MeTC7預(yù)處理C57BL/6小鼠（50 mg·kg?1），12小時(shí)后靜脈注射包裹Fluc mRNA的C-CholF3 ENDO LNPs（0.5 mg·kg?1）（圖6B）。注射后24小時(shí)的IVIS成像顯示，PBS處理的小鼠胰腺中熒光素酶表達(dá)強(qiáng)烈，證實(shí)了C-CholF3的胰腺靶向性（圖6C），而MeTC7預(yù)處理的小鼠胰腺信號(hào)完全消失，表明功能性VDR對(duì)組織選擇性遞送至關(guān)重要，MeTC7破壞了VDR與C-CholF3 LNPs的相互作用。此外，MC3 LNPs在MeTC7處理的小鼠中仍表現(xiàn)出強(qiáng)烈的肝臟蛋白表達(dá)，符合ApoE介導(dǎo)的肝臟靶向機(jī)制。

進(jìn)一步驗(yàn)證VDR的作用，將MeTC7作為第五組分替代膽鈣化醇，制備了靶向胰腺的LNPs。以0.5 mg·kg?1的劑量靜脈注射MeTC7 LNPs后，24小時(shí)的IVIS成像顯示胰腺中選擇性且強(qiáng)烈的熒光素酶表達(dá)（圖6D），表明MeTC7嵌入LNP后可與VDR相互作用，類(lèi)似于膽鈣化醇，從而促進(jìn)高效的胰腺靶向。這進(jìn)一步證實(shí)了LNP與VDR之間的直接相互作用，支持了一種新的VDR介導(dǎo)的遞送機(jī)制。

圖6 C-CholF3 ENDO LNPs內(nèi)源性靶向胰腺的機(jī)制探究。（a）共聚焦顯微鏡圖像顯示DiO標(biāo)記的C-CholF3和MC3 LNPs在BxPC-3細(xì)胞中的攝取和細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸情況。細(xì)胞用LysoTracker Red（內(nèi)體/溶酶體）和Hoechst 33342（細(xì)胞核）染色，處理后2小時(shí)成像以觀(guān)察納米顆粒定位，比例尺10 μm，放大60倍（n=3）。（b）使用MeTC7阻斷VDR的示意圖。小鼠腹膜內(nèi)注射50 mg·kg?1 MeTC7，12小時(shí)后靜脈注射mRNA LNPs。（c）為研究VDR作用，小鼠在注射LNP前12小時(shí)預(yù)先注射VDR拮抗劑MeTC7或PBS（對(duì)照）。C57BL/6小鼠靜脈注射LNP（0.5 mg·kg?1）后24小時(shí)的代表性IVIS圖像（n=4只生物學(xué)獨(dú)立小鼠）。器官?gòu)淖蟮接乙来螢椋盒呐K、肺、脾、胰腺、肝臟、腎臟和腸道。（d）代表性IVIS圖像、總通量的圖形表示和餅圖，說(shuō)明注射C-CholF3 LNP（以MeTC7代替膽鈣化醇作為第五種成分）后24小時(shí)各器官的蛋白表達(dá)百分比。小鼠接受靜脈注射，劑量為0.5 mg·kg?1（n=3只生物學(xué)獨(dú)立小鼠，±SD，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，NS表示不顯著，采用雙尾非配對(duì)t檢驗(yàn)）。器官?gòu)淖蟮接乙来螢椋盒呐K、肺、脾、胰腺、肝臟、腎臟和腸道

（6）利用 C-CholF3 ENDO LNPs 在胰腺中高效且組織特異性地表達(dá) tdTomato

利用Ai14小鼠模型評(píng)估了C-CholF3 LNPs的組織特異性基因編輯能力。該模型含有Cre介導(dǎo)基因編輯的構(gòu)建，CAG啟動(dòng)子下游有LoxP-stop-LoxP盒，成功遞送Cre重組酶后可激活tdTomato熒光（圖7A）。將包裹Cre重組酶mRNA的C-CholF3 LNPs以1.5 mg·kg?1的劑量靜脈注射到Ai14小鼠體內(nèi)，120小時(shí)后熒光成像顯示胰腺中tdTomato表達(dá)強(qiáng)烈，選擇性超過(guò)99%（圖7B、圖7C），而其他組織熒光不顯著。免疫熒光分析顯示，胰島素抗體染色的β細(xì)胞中出現(xiàn)tdTomato熒光，表明C-CholF3 ENDO LNPs在胰腺β細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)了有效的基因編輯（圖7D），但這種遞送并非僅限于β細(xì)胞。這些結(jié)果表明，該遞送系統(tǒng)能夠調(diào)節(jié)胰腺主要細(xì)胞類(lèi)型的基因表達(dá)，有望用于胰腺疾病的靶向治療。

為了評(píng)估C-CholF3 LNPs的臨床轉(zhuǎn)化潛力，將其安全性與已獲批的MC3配方（Onpattro）進(jìn)行了比較。在注射后4小時(shí)和24小時(shí)評(píng)估了C-CholF3和MC3的體內(nèi)轉(zhuǎn)染效率和毒性特征。IVIS成像顯示，C-CholF3在4小時(shí)時(shí)已在胰腺積累，平均總通量為3.52×10?，且在肝臟清除后未發(fā)生再分布；而MC3主要在肝臟積累，平均總通量為2.26×10?。24小時(shí)時(shí)，IVIS圖像顯示C-CholF3在胰腺的轉(zhuǎn)染效率高于MC3，平均總通量分別為3.47×10?和3.24×10?。安全性評(píng)估表明，C-CholF3的血清肝酶ALT和AST水平低于MC3，兩者對(duì)腎臟功能參數(shù)影響相似，且C-CholF3的細(xì)胞因子譜更優(yōu)，其中IL-6水平顯著低于MC3，而IL-1β水平高于MC3，總體支持C-CholF3具有更優(yōu)的安全性。

圖7 利用C-CholF3 ENDO LNPs在胰腺中高效且組織特異性地表達(dá)tdTomato。（a）Cre mRNA遞送及Cre介導(dǎo)的終止盒移除示意圖，激活A(yù)i14 Cre-loxP小鼠模型中的tdTomato表達(dá)，通過(guò)靜脈注射含Cre mRNA的LNPs并使用IVIS成像胰腺。（b）注射后120小時(shí)胰腺中tdTomato的代表性表達(dá)及含Cre mRNA的C-CholF3 LNPs總通量的圖形表示，以及以1.5 mg·kg?1劑量靜脈注射到Ai14小鼠的PBS處理對(duì)照（n=4只生物學(xué)獨(dú)立小鼠，±SD，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，NS表示不顯著，采用雙尾非配對(duì)t檢驗(yàn)）。（c）餅圖說(shuō)明靜脈注射含Cre mRNA的C-CholF3 LNPs后胰腺和肝臟中蛋白表達(dá)的百分比（n=4只生物學(xué)獨(dú)立小鼠）。（d）Ai14小鼠靜脈注射1.5 mg·kg?1劑量的包裹Cre mRNA的C-CholF3 LNPs和PBS（對(duì)照）后120小時(shí)胰腺切片的代表性免疫熒光圖像，使用胰島素抗體對(duì)β細(xì)胞染色，DAPI標(biāo)記細(xì)胞核，圖像采集自三只生物學(xué)獨(dú)立小鼠，放大40倍