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針對(duì)上述問(wèn)題，浙江大學(xué)周民教授團(tuán)隊(duì)開(kāi)發(fā)了一種基于Rhein的超分子網(wǎng)絡(luò)水凝膠（Rh Gel），并將其與微藻衍生的細(xì)胞外囊泡（SP-EVs）結(jié)合，形成Rh Gel@SP-EVs復(fù)合物，以期提高治療效果。通過(guò)一系列體外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了該復(fù)合物對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的氧化損傷具有顯著保護(hù)作用，并通過(guò)動(dòng)物模型評(píng)估了其在治療DMM（前交叉韌帶切斷術(shù)）誘導(dǎo)的OA中的療效。結(jié)果表明，Rh Gel@SP-EVs不僅能有效緩解炎癥反應(yīng)、促進(jìn)能量穩(wěn)態(tài)，還能增加關(guān)節(jié)軟骨厚度、改善OARSI評(píng)分，顯示出維持關(guān)節(jié)軟骨完整性的潛力。此外，安全性評(píng)估也證實(shí)了該復(fù)合物的良好生物相容性，為未來(lái)臨床應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。該文章于2025年2月21日以《Microalgae-Derived Extracellular Vesicles Synergize with Herbal Hydrogel for Energy Homeostasis in Osteoarthritis Treatment》為題發(fā)表于《ACS Nano》（DOI: 10.1021/acsnano.4c16085）。

研究示意圖

（1）SP-EV的分離、表征、和分析

圖1a描繪了SP-EVs的提取流程，通過(guò)梯度離心和連續(xù)過(guò)濾實(shí)現(xiàn)了有效純化；透射電子顯微鏡（TEM）圖像（圖1b）顯示了典型的50至100 nm盤(pán)狀囊泡結(jié)構(gòu)，證實(shí)了其形態(tài)特征（標(biāo)尺=50 nm）。粒徑分布和Zeta電位分析（圖1c-d）表明SP-EVs的尺寸集中在50-100納米范圍內(nèi)，Zeta電位約為-13 mV，進(jìn)一步驗(yàn)證了分離的有效性。蛋白質(zhì)組學(xué)分析（圖1e）揭示了SP-EVs中含有62種蛋白質(zhì)，基因本體論（GO）分類（圖1f-g）和京都基因與基因組百科全書(shū)（KEGG）通路分析（圖1h）顯示這些蛋白質(zhì)主要參與ATP依賴的活動(dòng)和代謝過(guò)程，強(qiáng)調(diào)了它們?cè)谀芰看x中的關(guān)鍵作用。此外，正交群組蛋白注釋（圖 S2）突出了翻譯、能量生產(chǎn)和轉(zhuǎn)換相關(guān)蛋白質(zhì)的重要性，表明SP-EVs在調(diào)節(jié)關(guān)節(jié)穩(wěn)態(tài)及骨關(guān)節(jié)炎（OA）病理生理方面具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。這些結(jié)果綜合說(shuō)明了SP-EVs作為一種治療OA的新策略的可能性，特別是在調(diào)節(jié)能量代謝方面的作用。

圖1. SP-EV的提取、表征和分析。（a）SP-EV的浸提過(guò)程；（b）SP-EV的透射電子顯微鏡（TEM）圖像，比例尺 = 50 nm；（c）SP-EV的粒度；（d）SP-EV的Zeta電位（n = 3）；（e）通過(guò)蛋白質(zhì)組學(xué)分析表征SP-EV中的蛋白質(zhì)組分；（f）SP-EV中蛋白質(zhì)的分子功能（MF）；（g）與SP-EV中蛋白質(zhì)相關(guān)的生物學(xué)過(guò)程（BP）；（h）SP-EV的京都基因和基因組百科全書(shū)（KEGG）富集分析

（2）Rh Gel@SP-EVs的合成與表征

首先，圖2a提供了Rh Gel@SP-EVs的合成流程示意圖，通過(guò)將Rh Gel（由加熱溶解于碳酸氫鈉溶液中并冷卻后自組裝形成）與SP-EVs結(jié)合，制備了穩(wěn)定的三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)。不同濃度（2, 4, 8 mg/mL）的Rh Sol和Rh Gel的照片及其紫外可見(jiàn)光譜和熒光光譜分析（圖 2b-c）顯示，隨著Rh濃度增加，樣品顏色加深且吸收峰和熒光強(qiáng)度增強(qiáng)。UV熒光光譜和Zeta電位分析（圖 2d-e）表明Rh Gel具有較高的穩(wěn)定性，適合用于藥物遞送系統(tǒng)。掃描電子顯微鏡（SEM）圖像（圖2f）揭示了Rh Gel表面光滑的外表皮層，有助于保持其穩(wěn)定性和均勻性。照片對(duì)比（圖2g）直觀地展示了SP-EVs、Rh Sol、Rh Gel以及Rh Gel@SP-EVs之間的差異，證實(shí)了復(fù)合材料的成功制備。紫外可見(jiàn)吸收光譜圖（圖2h）顯示Rh Gel@SP-EVs同時(shí)具有SP-EVs特有的680 nm吸收峰和Rh Gel的435 nm吸收峰，證明了兩種成分的有效結(jié)合。Zeta電位分析（圖2i）表明Rh Gel@SP-EVs的Zeta電位較Rh Gel有所降低，但不影響其整體穩(wěn)定性。不同pH值條件下從Rh Gel@SP-EVs中釋放的Rh的照片（圖2j）及詳細(xì)記錄的PBS溶液中不同pH值下的Rh釋放動(dòng)力學(xué)曲線（圖2k）顯示，在酸性環(huán)境下（pH 5.5），Rh的累積釋放率達(dá)到92%，而在中性環(huán)境下（pH 7.4）僅為68%，表明該系統(tǒng)具有顯著的pH響應(yīng)性釋放特性。綜上所述，Rh Gel@SP-EVs不僅成功結(jié)合了SP-EVs的生物活性成分和Rh Gel的物理化學(xué)特性，還展示了良好的穩(wěn)定性和pH響應(yīng)性藥物釋放特性，適用于模擬炎癥環(huán)境下的藥物遞送。

圖2. Rh Gel@ SP-EV的合成、表征和藥物釋放。（a）Rh Gel@ SP-EV的合成程序；（b）顯示不同Rh濃度（2、4、8 mg/mL）的Rh溶膠和Rh Gel形成的照片；（c）在2、4和8 mg/mL的不同Rh濃度下，分析了Rh溶膠和Rh Gel樣品的UV?Vis和熒光光譜（d）；（e）Rh溶膠和Rh Gel樣品的Zeta電位（n = 3）；（f）Rh Gel樣本的代表性SEM圖像，比例尺 = 1 μm；（g）SP-EV、Rh溶膠、Rh Gel和Rh Gel在SP-EV上的照片；（h）不同基團(tuán)的紫外-Vis吸收光譜；（i）各組的Zeta電位（n = 3）；（j）在不同pH水平（pH 5.5和7.4）下，從Rh Gel@ SP-EV在PBS溶液中獲得的Rh釋放介質(zhì)的照片；（k）在不同pH值的PBS溶液中，Rh從Rh Gel@ SP-EV的釋放動(dòng)力學(xué)（n = 3）。數(shù)據(jù)表示為平均值 ± SD

（3）Rh Gel@ SP-EV的細(xì)胞毒性和細(xì)胞攝取

圖3a展示了使用CCK-8實(shí)驗(yàn)測(cè)定軟骨細(xì)胞系A(chǔ)TDC5細(xì)胞與不同處理物（PBS、SP-EVs、Rh Sol、Rh Gel和Rh Gel@SP-EVs）共孵育1、2、3天后的細(xì)胞活力情況，結(jié)果顯示Rh Gel@SP-EVs（Rh 5 μg/mL和SP-EVs 20 μg/mL）在共孵育期間對(duì)細(xì)胞活力影響極小，表明其具有良好的生物相容性。圖3b通過(guò)活/死細(xì)胞染色進(jìn)一步驗(yàn)證了Rh Gel@SP-EVs在這些濃度下無(wú)明顯細(xì)胞毒性。為了觀察SP-EVs的細(xì)胞攝取效率，研究人員用膜標(biāo)記染料PKH67標(biāo)記SP-EVs，并利用共聚焦顯微鏡成像（圖3c），發(fā)現(xiàn)SP-EVs能夠高效地進(jìn)入ATDC5細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中，證明了其良好的細(xì)胞穿透能力。此外，體內(nèi)熒光成像（圖3d）顯示了PKH67標(biāo)記的SP-EVs在小鼠膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞內(nèi)的累積情況，進(jìn)一步證實(shí)了SP-EVs不僅能夠進(jìn)入細(xì)胞并遞送分子貨物，還能影響目標(biāo)細(xì)胞的生物學(xué)功能。綜上所述，這些結(jié)果驗(yàn)證了SP-EVs被軟骨細(xì)胞攝取的能力，突顯了這些納米囊泡在向細(xì)胞傳遞生物活性分子方面的潛力。

圖3. Rh Gel@ SP-EV的細(xì)胞毒性和細(xì)胞攝取。（a）通過(guò)用SP-EV、Rh Sol、Rh Gel和Rh Gel@ SP-EV干預(yù)1、2和3天來(lái)評(píng)估ATDC 5細(xì)胞的活力，CCK-8測(cè)定結(jié)果（n = 3），數(shù)據(jù)表示為平均值 ± SD；（b）用各組處理1、2和3天后ATDC 5細(xì)胞的鈣黃綠素-AM/PI染色，綠色表示活細(xì)胞，紅色表示死細(xì)胞，比例尺 = 100 μm；（c）ATDC 5細(xì)胞中SP-EV的細(xì)胞攝取，細(xì)胞核（藍(lán)色），SP-EV（用PKH 67標(biāo)記，綠色），比例尺 = 50 μm；（d）膝關(guān)節(jié)組織切片中SP-EV的細(xì)胞攝取，細(xì)胞核（藍(lán)色），SP-EV（用PKH 67標(biāo)記，綠色），比例尺 = 100 μm

（4）Rh Gel@ SP-EV對(duì)線粒體功能障礙的緩解作用

圖4a和4b展示了通過(guò)DCFH-DA熒光探針檢測(cè)ATDC5細(xì)胞內(nèi)ROS水平的結(jié)果，表明Rh Gel@SP-EVs顯著降低了ROS生成（P<0.01），相較于單獨(dú)使用SP-EVs、Rh Sol或Rh Gel也顯示出中等程度的ROS減少。透射電子顯微鏡（TEM）圖像（圖4c）顯示，TNF-α處理導(dǎo)致嚴(yán)重的線粒體損傷，包括腫脹、肥大和嵴結(jié)構(gòu)破壞；而SP-EVs和Rh Gel@SP-EVs處理顯著改善了這些損傷，恢復(fù)了線粒體的正常形態(tài)和嵴結(jié)構(gòu)。JC-1染色實(shí)驗(yàn)（圖4d-e）進(jìn)一步證明Rh Gel@SP-EVs能夠顯著提高線粒體膜電位（ΔΨm），紅/綠熒光比率從5.9恢復(fù)至10.4。Western blot分析（圖4f-h）顯示，Rh Gel@SP-EVs增加了線粒體轉(zhuǎn)錄因子A（TFAM）和ATP合酶（ATPB）的表達(dá)，這表明它促進(jìn)了線粒體生物發(fā)生并提高了ATP含量（圖4i-j）。免疫熒光分析（圖 4i和S10）同樣證實(shí)了ATP含量的顯著增加。這些結(jié)果共同表明，Rh Gel@SP-EVs不僅顯著減少了氧化應(yīng)激，還通過(guò)增強(qiáng)線粒體功能和能量代謝來(lái)改善細(xì)胞健康，具有重要的治療潛力。

圖4. Rh Gel@ SP-EV對(duì)ROS、線粒體功能障礙和細(xì)胞能量代謝的保護(hù)作用。（a）在NC、TNF-α、SP-EV、Rh Sol、Rh Gel和Rh Gel@ SP-EV條件下，用DCFH-DA處理的ATDC 5細(xì)胞中細(xì)胞內(nèi)ROS水平的熒光圖像，DCFH-DA（綠色），細(xì)胞核（藍(lán)色），比例尺 = 200 μm；（b）不同處理后ATDC 5細(xì)胞中DCFH-DA的表達(dá)率；（c，d）在各種條件下處理的ATDC 5細(xì)胞的TEM圖像（c）和JC-1染色（d），JC-1的聚集體為紅色，而JC-1的單體為綠色；（e）分析JC-1染色的紅/綠色強(qiáng)度的平均熒光比（n = 3）；（f?h）在不同條件下ATDC 5細(xì)胞中TFAM和ATPB的蛋白質(zhì)印跡結(jié)果；（h）不同條件下ATDC 5細(xì)胞中ATPB蛋白表達(dá)水平的定量（n = 3）；（i）不同條件下ATDC 5細(xì)胞中ATPB的免疫熒光染色，ATPB（綠色），細(xì)胞核（藍(lán)色），比例尺 = 100 μm；（j）ATDC 5細(xì)胞在不同條件下的ATP水平；（k）Rh Gel@ SP-EV拯救炎癥誘導(dǎo)的線粒體功能障礙并減少活性氧（ROS）產(chǎn)生，從而增強(qiáng)ATP合成的機(jī)制示意圖

（5）Rh Gel@ SPEV的促合成代謝和抗代謝作用

圖5a提供了實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的示意圖，通過(guò)RT-PCR分析TNF-α誘導(dǎo)的ATDC5細(xì)胞中的炎癥因子表達(dá)（圖5b），結(jié)果顯示TNF-α顯著上調(diào)了IL-6和IL-1β等炎癥標(biāo)記物的表達(dá)。為了評(píng)估合成代謝相關(guān)基因的表達(dá)，研究人員檢測(cè)了Sox9和Col2a1的表達(dá)水平（圖5c），發(fā)現(xiàn)TNF-α處理顯著下調(diào)了這些基因的表達(dá)。此外，分解代謝相關(guān)基因如Mmp13和Adamts4/5的表達(dá)水平也顯著增加（圖5d）。然而，SP-EVs、Rh Sol、Rh Gel以及Rh Gel@SP-EVs的應(yīng)用有效抑制了IL-6和IL-1β mRNA的上調(diào)，并緩解了Sox9和Col2a1的下調(diào)（圖5e-f）。Western blot分析（圖5g）進(jìn)一步驗(yàn)證了Rh Gel@SP-EVs顯著降低了MMP13和ADAMTS5的蛋白質(zhì)表達(dá)，減少了基質(zhì)降解并促進(jìn)了軟骨基質(zhì)的合成。這些結(jié)果表明，Rh Gel@SP-EVs不僅能夠減輕炎癥反應(yīng)，還能促進(jìn)軟骨細(xì)胞的合成代謝并抑制其分解代謝，為治療骨關(guān)節(jié)炎提供了新的潛在策略。

圖5. Rh Gel@SP-EVs對(duì)ECM合成代謝與分解代謝平衡調(diào)節(jié)的影響。（a）軟骨細(xì)胞內(nèi)環(huán)境平衡的示意圖。軟骨細(xì)胞的平衡是通過(guò)ECM合成代謝和分解代謝的動(dòng)態(tài)相互作用來(lái)維持的，由降解相關(guān)酶和合成相關(guān)酶進(jìn)行機(jī)械調(diào)節(jié)；（b?d）實(shí)時(shí)定量PCR（RT-PCR）檢測(cè)TNF-α、SP-EVs、Rh Sol、Rh Gel和Rh Gel@SP-EVs處理后ATDC 5細(xì)胞中的相對(duì)mRNA表達(dá)（IL-6、IL-1β、Sox 9、Col 2a 1、Mmp 13、Adamts 4和Adamts 5）（n = 3）；（e，f）在各種條件下對(duì)ATDC 5細(xì)胞中的SOX 9、COL II和MMP 13進(jìn)行免疫熒光染色和定量，比例尺 = 100 μm；（g）在各種條件下，ATDC 5細(xì)胞中各種蛋白（SOX 9、COL II和MMP 13）的表達(dá)水平的蛋白質(zhì)印跡定量（n = 3）

（6）Rh Gel@ SP-EV對(duì)JAK/STAT 3信號(hào)通路的抑制

圖6a和6b展示了RNA測(cè)序結(jié)果，表明與TNF-α刺激組相比，SP-EVs處理組中有1116個(gè)基因下調(diào)，161個(gè)基因上調(diào)?；蚣患治觯℅SEA）（圖6c-e）顯示，SP-EVs顯著下調(diào)了與ROS途徑相關(guān)的基因，并顯著上調(diào)了與線粒體功能和氧化磷酸化相關(guān)的基因表達(dá)。KEGG通路分析（圖6f）進(jìn)一步確認(rèn)了鈣信號(hào)通路、細(xì)胞因子信號(hào)傳導(dǎo)及JAK/STAT通路在SP-EVs處理后的顯著變化。Western blot分析（圖6h）顯示，TNF-α處理顯著增強(qiáng)了JAK2和STAT3的磷酸化水平，而SP-EVs和Rh Gel@SP-EVs處理顯著降低了這些磷酸化水平。定量RT-PCR結(jié)果顯示（圖6i-j），TNF-α刺激后Jak1、Jak2和Jak3 mRNA表達(dá)顯著上調(diào)，而在SP-EVs和Rh Gel@SP-EVs干預(yù)后，Jak2和Jak3 mRNA表達(dá)顯著下調(diào)，Jak1則顯示出下調(diào)趨勢(shì)但未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這些結(jié)果表明，Rh Gel@SP-EVs通過(guò)精確靶向抑制JAK2磷酸化來(lái)失活JAK2/STAT3信號(hào)通路，從而發(fā)揮抗炎作用，并且通過(guò)減少氧化應(yīng)激和促進(jìn)能量代謝來(lái)改善軟骨細(xì)胞的功能。

圖6. 線粒體能量代謝與炎癥調(diào)控機(jī)制。（a）熱圖顯示TNF-α刺激后SP-EV處理ATDC 5細(xì)胞中差異表達(dá)的基因；（b）火山圖顯示161個(gè)基因的表達(dá)上調(diào)，1116個(gè)基因的表達(dá)下調(diào)；（c?g）GSEA用于評(píng)估和對(duì)比ROS（c）、線粒體基因表達(dá)（d）、氧化磷酸化（e）和IL-6/JAK/STAT 3信號(hào)通路（g）中基因組的富集；（f）ATDC 5細(xì)胞中差異表達(dá)基因的KEGG通路分析，用TNF-α刺激ATDC 5細(xì)胞，然后用SP-EV處理；（h）不同條件下ATDC 5細(xì)胞中各種蛋白質(zhì)（p-JAK 2、JAK 2、p-STAT 3、STAT 3和β-肌動(dòng)蛋白）的蛋白質(zhì)印跡結(jié)果；（i?j）RT-PCR檢測(cè)不同條件下ATDC 5細(xì)胞中相對(duì)mRNA表達(dá)（Jak 1、Jak 2、Jak 3和Stat 3）（n = 3）

（7）Rh Gel@ SP-EV對(duì)DMM誘導(dǎo)的OA的治療作用

圖7a提供了實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)示意圖，展示了通過(guò)每周一次的關(guān)節(jié)內(nèi)注射PBS、SP-EVs、Rh Sol、Rh Gel或Rh Gel@SP-EVs進(jìn)行治療前交叉韌帶切斷術(shù)（DMM）誘導(dǎo)的OA的過(guò)程。隨后，通過(guò)微計(jì)算機(jī)斷層掃描（micro-CT）分析（圖7b），研究人員發(fā)現(xiàn)DMM誘導(dǎo)的小鼠表現(xiàn)出明顯的軟骨下骨損傷，表現(xiàn)為密集且紊亂的骨小梁結(jié)構(gòu)；而經(jīng)過(guò)Rh Gel@SP-EVs處理后，這些病理變化顯著減輕，顯示了較好的骨修復(fù)效果。H&E染色和番紅O/快綠染色（圖7c）進(jìn)一步揭示了DMM組中嚴(yán)重的軟骨退化、厚度減少和表面不規(guī)則；相比之下，Rh Gel@SP-EVs處理組顯著改善了軟骨表面完整性，并增加了軟骨厚度和面積。OARSI評(píng)分（圖7d）、糖胺聚糖（GAG）含量（圖7e）以及軟骨厚度（圖7f）的定量分析均表明，Rh Gel@SP-EVs顯著降低了OA的嚴(yán)重程度并促進(jìn)了軟骨再生。免疫熒光染色（圖7g）則顯示，在Rh Gel@SP-EVs處理組中，II型膠原（COL II）和聚集蛋白聚糖（ACAN）的表達(dá)顯著增加，同時(shí)IL-6表達(dá)顯著降低，這表明該復(fù)合物不僅促進(jìn)了軟骨基質(zhì)的合成，還減少了炎癥反應(yīng)。

圖7. Rh Gel@SP-EVs處理對(duì)DMM誘導(dǎo)的OA的體內(nèi)治療效果。（a）評(píng)價(jià)Rh Gel@SP-EVs治療在DMM誘導(dǎo)的OA小鼠模型中的保護(hù)效力的示意圖和實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)；（b）關(guān)節(jié)軟骨下骨的三維重建圖像；（c）膝關(guān)節(jié)切片的H&E染色，對(duì)膝關(guān)節(jié)切片進(jìn)行番紅-O/固綠色染色，番紅-O可將軟骨染成紅色；（d）OARSI評(píng)分的量化（n = 6）；（e）6份樣品中GAG含量的分析；（f）關(guān)節(jié)軟骨厚度的定量（n = 6）；（g）小鼠膝關(guān)節(jié)的代表性免疫熒光染色（COL II、ACAN和IL-6）

（8）Rh Gel@ SP-EV在MIAA誘導(dǎo)的OA中的治療作用

圖8a為實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)示意圖，描述了通過(guò)每周一次的關(guān)節(jié)內(nèi)注射PBS、SP-EVs、Rh Sol、Rh Gel或Rh Gel@SP-EVs進(jìn)行治療單碘乙酸鈉（MIA）誘導(dǎo)的OA的過(guò)程。隨后，通過(guò)micro-CT分析（圖8b），研究人員發(fā)現(xiàn)MIA處理的小鼠表現(xiàn)出顯著的軟骨下骨損傷，包括紊亂且密集的骨小梁結(jié)構(gòu)；而Rh Gel@SP-EVs處理組則顯著減輕了這些病理變化，顯示了良好的骨修復(fù)效果。H&E染色和番紅O/快綠染色（圖8c）進(jìn)一步揭示了MIA組中嚴(yán)重的軟骨退化、厚度減少和表面不規(guī)則；相比之下，Rh Gel@SP-EVs處理組顯著改善了軟骨表面完整性，并增加了軟骨厚度和面積。OARSI評(píng)分（圖8d）、糖胺聚糖（GAG）含量（圖8e）以及軟骨厚度（圖8f）的定量分析均表明，Rh Gel@SP-EVs顯著降低了OA的嚴(yán)重程度并促進(jìn)了軟骨再生。免疫熒光染色（圖8g）顯示，在Rh Gel@SP-EVs處理組中，II型膠原（COL II）和聚集蛋白聚糖（ACAN）的表達(dá)顯著增加，同時(shí)IL-6表達(dá)顯著降低，這表明該復(fù)合物不僅促進(jìn)了軟骨基質(zhì)的合成，還減少了炎癥反應(yīng)。

圖8. Rh Gel@SP-EVs處理對(duì)MIA誘導(dǎo)的OA的體內(nèi)治療效果。（a）在MIA誘導(dǎo)的OA模型中評(píng)價(jià)Rh Gel@SP-EVs治療有效性的示意圖和實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)；（b）關(guān)節(jié)軟骨下骨的三維重建圖像（通過(guò)顯微CT分析）；（c）采用H&E染色以及番紅-O/固綠色染色對(duì)小鼠關(guān)節(jié)切片進(jìn)行組織學(xué)分析，番紅-O可將軟骨染成紅色；（d）OARSI評(píng)分的量化（n = 6）；（e）GAG含量的定量（n = 6）；（f）關(guān)節(jié)軟骨厚度的定量（n = 6）；（g）小鼠膝關(guān)節(jié)的代表性免疫熒光染色（COL II、ACAN、IL-6）

（9）Rh Gel@ SP-EV的體內(nèi)生物相容性

血液學(xué)測(cè)試顯示，所有治療組與對(duì)照組相比，血液參數(shù)均在正常范圍內(nèi)，無(wú)顯著差異，表明Rh Gel@SP-EVs未引起明顯的全身毒性反應(yīng)。接著，圖9b展示了肝腎功能參數(shù)（包括丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、血尿素氮（BUN）和肌酐（CREA））的測(cè)定結(jié)果，結(jié)果顯示這些指標(biāo)在所有處理組中均保持在正常范圍內(nèi)，進(jìn)一步證實(shí)了Rh Gel@SP-EVs的安全性。最后，圖9c通過(guò)H&E染色對(duì)主要器官（心臟、肝臟、脾臟、肺和腎臟）進(jìn)行了組織學(xué)分析，結(jié)果顯示各組之間無(wú)顯著炎癥或其他不良反應(yīng)，表明Rh Gel@SP-EVs具有良好的體內(nèi)生物相容性。

圖9. Rh Gel@ SP-EV的體內(nèi)生物相容性。（a）不同處理后小鼠的血液學(xué)檢查（n = 3），包括：白色細(xì)胞（WBC）、平均紅細(xì)胞血紅蛋白（MCH）、血紅蛋白（HGB）和紅細(xì)胞（RBC）；平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度平均值（MCHC）、細(xì)胞體積（MCV）；血小板（PLT）；血紅蛋白濃度（HCT）；（b）不同處理后小鼠的血清生化分析（n = 5），包括：ALT（丙氨酸轉(zhuǎn)移酶）、AST（天冬氨酸轉(zhuǎn)移酶）、BUN（血尿素氮）、CREA（肌酐）；（c）在給藥后，使用H&E染色對(duì)小鼠的主要器官（包括心、肝、脾、肺、腎和膝關(guān)節(jié)）進(jìn)行組織學(xué)分析